（来源：抗体圈）

一、研究背景：传统 ADC 的痛点与糖基偶联的优势

传统 ADC 化学偶联方法（马来酰亚胺结合二硫键、胺基偶联赖氨酸）会产生异质化产物，导致 ADC 循环半衰期缩短、疗效降低且存在脱靶效应。而人 IgG 抗体 Fc 域 N297 位的保守 N - 糖基为定点偶联提供了理想靶点：其位于 Fc 结构域之间，远离抗原结合位点，化学组成与氨基酸不同，可实现特异性修饰，且不会破坏抗体的核心结合功能。

二、Fc 糖基的主要偶联技术方向

目前针对 IgG Fc 保守糖基的偶联技术主要靶向糖基的不同位点，各有特点：

1.核心岩藻糖：通过高碘酸盐氧化结合酰肼反应偶联，或代谢工程引入 6 - 硫代岩藻糖实现巯基修饰，保留抗体免疫反应性且稳定性良好；

2.唾液酸：需先酶促添加半乳糖和唾液酸，再通过氧化形成醛基进行肟连接，但易引发甲硫氨酸氧化影响 FcRn 结合，偶联后药物抗体比率（DAR）约 1.6；

3.半乳糖：通过 β- 半乳糖苷酶切除天然半乳糖，再经工程化半乳糖基转移酶（GalT）连接酮基 / 叠氮修饰的半乳糖，可结合无铜点击化学，为 SiteClick™技术基础，适用于成像与治疗双功能 ADC 制备；

4.核心 GlcNAc：本文核心技术靶点，通过 IgG 特异性内切糖苷酶切除天然糖基暴露核心 GlcNAc，再经酶促修饰与点击化学偶联，实现 DAR=2.0 的均一偶联，为 GlyCLICK® 技术核心。

三、核心技术：GlyCLICK® 偶联技术的原理与流程

GlyCLICK® 技术结合两步酶促反应与无铜叠氮 - 炔烃应变促进点击化学（SPAAC），靶向 Fc 糖基的核心 GlcNAc，实现定点、均一偶联，核心步骤为：

GlyCLICK 偶联技术将两步酶促反应与后续的无铜叠氮 - 炔基点击化学反应相结合。

第一步：酶促脱糖基，暴露核心 GlcNAc

利用链球菌来源的EndoS2 内切糖苷酶（Immobilized GlycINATOR），特异性水解 Fc 区的天然复杂糖基，仅保留与天冬酰胺连接的核心 GlcNAc。

该酶可水解所有 IgG 亚类的 Fc 糖基，脱糖基效率 100%，且不会破坏抗体的整体结构；酶以固定化形式存在，反应后可快速分离，避免抗体被酶降解。

第二步：酶促叠氮活化，给抗体 “贴” 上专属 “标签”

通过工程化半乳糖基转移酶 GalT (Y289L)，将带有叠氮基团（-N3）的半乳糖类似物（GalNAz），精准转移至暴露的核心 GlcNAc 上。工程化酶的底物特异性被改造，可高效识别 GlcNAc 并连接 GalNAz，实现 Fc 区两个位点的精准活化；叠氮基团为生物正交基团，在体内不会与其他分子发生非特异性反应，为后续偶联提供 “专属接口”。

第三步：无铜点击化学，实现药物与抗体的精准 “牵手”

利用无铜叠氮 - 炔烃应变促进点击化学（SPAAC），让叠氮活化的抗体与环辛炔修饰的细胞毒性药物发生共价结合，形成稳定的三唑键。无需铜离子催化，避免铜离子对抗体和细胞的毒性，反应条件温和（25℃避光过夜），适合生物大分子；点击化学的反应特异性接近 100%，仅在叠氮与环辛炔之间发生反应，确保偶联的位点专一性；

最终得到 Fc 区两个位点定点偶联的 ADC，DAR 精准为 2.0，无杂化产物。

四、技术优势：均一性、功能性与生物学活性

1.高度均一：偶联后 DAR 精准为 2.0，疏水相互作用色谱（HIC）呈现单一均一峰，无杂化产物；

2.保留抗原结合能力：表面等离子体共振（SPR）分析显示，偶联后的 ADC 与亲本抗体的抗原结合亲和力无显著差异（曲妥珠单抗 KD=1.33 nM，偶联后 KD=1.52 nM）；

3.优化的药代与安全性：脱糖基化破坏了抗体与 Fc-γ 受体的相互作用，降低脱靶效应，同时保留与 FcRn 的结合，维持正常的体内循环半衰期；

4.高效抗肿瘤活性：以抗 uPARAP 抗体偶联 PBD 二聚体毒素为例，该方法制备的ADC 在体外可高效杀伤肿瘤细胞，对肉瘤患者原代样本有效，且在体内仅需 2 mg/kg 单剂量即可治愈荷瘤小鼠。